滅菌制劑和無(wú)菌制劑

第一節(jié)  概述
滅菌（sterilization)：系指用物理或化學(xué)等方法殺滅或除去所有致病和非致病微生物繁殖體和芽孢的手段。
滅菌法（the technique of sterilization)：系指殺滅或除去所有致病和非致病微生物繁殖體和芽孢的方法或技術(shù)
無(wú)菌（sterility)：系指在人一指定物體、介質(zhì)或環(huán)境中，不得存在任何活的微生物。
無(wú)菌操作（asepic technique)：系指在整個(gè)操作過(guò)程中利用和控制一定條件，使產(chǎn)品避免被微生物污染的一種操作方法或技術(shù)。
防腐（antisepsis)：系指用物理或化學(xué)方法抑制微生物的生長(zhǎng)與繁殖的手段，亦稱(chēng)抑菌。對(duì)微生物的生長(zhǎng)與繁殖具有抑制作用的物質(zhì)稱(chēng)抑菌劑或防腐劑。
消毒（disinfection)：系指用物理或化學(xué)方法殺滅或除去病原微生物的手段。對(duì)病原微生物具有殺滅或除去作用的物質(zhì)稱(chēng)消毒劑。
一、滅菌制劑與無(wú)菌制劑的定義與分類(lèi)
限菌制劑： 是指允許一定限量的微生物存在，但不得有規(guī)定控制菌存在的藥物制劑。如口服制劑不得含大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等有害菌。
滅菌制劑：系指采用某一物理、化學(xué)方法殺滅或除去所有活的微生物繁殖體和芽孢的一類(lèi)藥物制劑。
無(wú)菌制劑：系指采用某一操作方法或技術(shù)制備的不含任何活的微生物繁殖體和芽孢的一類(lèi)藥物制劑。
無(wú)菌制劑包括注射用制劑、眼用制劑、植入型制劑、創(chuàng)傷用制劑、手術(shù)用制劑
二、滅菌與無(wú)菌技術(shù)
目的：提高藥物制劑的安全性、保護(hù)制劑的穩(wěn)定性、保證制劑的臨床療效
滅菌法：物理滅菌法、化學(xué)滅菌法、無(wú)菌操作法
（一）物理滅菌技術(shù)  利用蛋白質(zhì)與核酸具有遇熱、射線(xiàn)不穩(wěn)定的特性，采用加熱、射線(xiàn)和過(guò)濾方法，殺滅或除去微生物的技術(shù)稱(chēng)為物理滅菌法，亦稱(chēng)物理滅菌技術(shù)。包括：1. 干熱滅菌法2. 濕熱滅菌法3. 過(guò)濾滅菌法4. 射線(xiàn)滅菌法
1. 干熱滅菌法  系指在干燥環(huán)境中進(jìn)行滅菌的技術(shù)。包括：火焰滅菌法、干熱空氣滅菌法
滅菌溫度和時(shí)間：
135 ~ 145℃滅菌3 ~ 5h；
160 ~ 170℃滅菌2 ~ 4h；
180 ~ 200℃滅菌0.5 ~ 1h
火焰滅菌法  系指用火焰直接灼燒滅菌的方法。該法適用于耐火焰材質(zhì)（如金屬、玻璃及瓷器等）的物品與用具的滅菌，不適合藥品的滅菌。
干熱空氣滅菌法  系指用高溫干熱空氣滅菌的方法。該法適用于耐高溫的玻璃和金屬制品以及不允許濕氣穿透的油脂類(lèi)（如油性軟膏基質(zhì)、注射用油等）和耐高溫的粉末化學(xué)藥品的滅菌，不適于橡膠、塑料及大部分藥品的滅菌。
2. 濕熱滅菌法  系指用飽和蒸氣 、沸水或流通蒸氣進(jìn)行進(jìn)行滅菌的方法。包括：熱壓滅菌法、流通蒸氣滅菌法、煮沸滅菌法、低溫間歇滅菌法
熱壓滅菌法 系指用高壓飽和水蒸氣加熱殺滅微生物的方法。能殺滅所有細(xì)菌繁殖體和芽孢，適用于耐高溫和耐高壓蒸汽的所有藥物制劑 、玻璃容器、金屬容器、瓷器、橡膠塞、濾膜過(guò)濾器等。
影響濕熱滅菌因素  微生物的種類(lèi)和數(shù)量（耐熱、壓次序：芽孢＞繁殖體＞衰老體）、蒸氣性質(zhì)、藥物性質(zhì)和滅菌時(shí)間、其他 如介質(zhì)pH（一般情況下，在中性環(huán)境下微生物的耐熱性最強(qiáng)，堿性環(huán)境次之，酸性環(huán)境則不利于微生物的生長(zhǎng)和發(fā)育）和介質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)成分（營(yíng)養(yǎng)高
，抗熱性強(qiáng)）等
濕熱滅菌原則：在達(dá)到有效滅菌的前提下，盡可能降低滅菌溫度和縮短滅菌時(shí)間。
流通蒸氣滅菌器滅菌法  系指在常壓下，采用100℃流通蒸氣加熱殺滅微生物的方法。滅菌時(shí)間通常為30~60min。該法適用于消毒及不耐高熱制劑的滅菌。但不能保證殺滅所有的芽孢，不是可靠的滅菌法。
煮沸滅菌法  系指將待滅菌物品置沸水中加熱滅菌的方法。煮沸 時(shí)間通常為30~60min。該法滅菌效果較差，常用于注射劑、注射針等器皿的消毒。必要時(shí)加入適量的抑菌劑，如三氯叔丁醇、甲酚、氯甲酚等，以提高滅菌效果。
低溫間歇滅菌法  系指將待滅菌物置60~80℃的水或流通蒸氣中加熱60min，殺滅微生物繁殖體后，在室溫條件下放置24h，讓待滅菌物中的芽孢發(fā)育成繁殖體，再次加熱滅菌、放置，反復(fù)多次，直至殺滅所有芽孢。該法適用于不耐高溫、熱敏感物料和制劑的滅菌。
缺點(diǎn)是費(fèi)時(shí)、工效低、滅菌效果差，加入適量抑菌劑可提高滅菌效率。
3. 過(guò)濾滅菌法  系指采用過(guò)濾法除去微生物的方法。該法屬于機(jī)械除菌方法，該機(jī)械稱(chēng)為除菌過(guò)濾器。該法適用于對(duì)熱不穩(wěn)定的藥液、氣體、水等物品的滅菌。
4. 射線(xiàn)滅菌法  系指采用輻射、微波和紫外線(xiàn)殺滅微生物和芽孢的方法。包括：（1）輻射滅菌法（2）微波滅菌法（3）紫外線(xiàn)滅菌法
（1）輻射滅菌法 系指采用放射線(xiàn)同位素（⁶⁰C_o和¹³⁷C_s）放射的 γ 射線(xiàn)殺滅微生物和芽孢的方法。  本品適用于熱敏物料和制劑的滅菌
優(yōu)點(diǎn)：不升高產(chǎn)品溫度，穿透力強(qiáng)，滅菌效率高。
缺點(diǎn)：設(shè)備費(fèi)用較高，對(duì)操作人員存在潛在的危險(xiǎn)性，對(duì)某些藥物（特別是溶液型）可能產(chǎn)生藥效降低或產(chǎn)生毒性物質(zhì)和發(fā)熱物質(zhì)等。
（2）微波滅菌法  采用微波（頻率為300MHz~300kMHz)照射產(chǎn)生的熱能殺滅微生物和芽孢的方法。該法適用于液體和固體物料的滅菌，且對(duì)固體物料具有干燥作用。
特點(diǎn)：微波能穿透到介質(zhì)和物料的深部，可使介質(zhì)和物料表里一致地加熱；且具有低溫、常壓、高效、快速、低能耗、無(wú)污染、易操作、易維護(hù)、產(chǎn)品保質(zhì)期長(zhǎng)等特點(diǎn)。
微波殺菌機(jī)理：熱效應(yīng)—使微生物中蛋白質(zhì)變性而失活。非熱效應(yīng)—干擾了微生物正常的新陳代謝，破壞微生物的生長(zhǎng)環(huán)境。
低溫（70~80℃）即可殺滅微生物，不影響藥物的穩(wěn)定性。
（3）紫外線(xiàn)滅菌法  系指用用紫外線(xiàn)（能量）照射殺滅微生物和芽孢的方法。用于紫外滅菌的波長(zhǎng)一般為200~300nm，最強(qiáng)滅菌力的波長(zhǎng)為254nm。該法適用于照射物表面滅菌、無(wú)菌室空氣及蒸餾水的滅菌。不適合于藥液的滅菌及固體物料深部的滅菌。
滅菌機(jī)理：紫外線(xiàn)可導(dǎo)致核酸蛋白變性，又能使空氣中氧氣產(chǎn)生微量臭氧。
特點(diǎn)：紫外線(xiàn)穿透能力弱，并能被普通玻璃吸收，裝于容器中的藥物不能用紫外線(xiàn)滅菌。紫外線(xiàn)對(duì)人體有一定的傷害
（二）  化學(xué)滅菌法  系指用化學(xué)藥品直接作用于微生物而將其殺滅的方法。
氣體滅菌法   該法適用于環(huán)境消毒和不耐熱的醫(yī)用器具、設(shè)備和設(shè)施等的消毒，亦用于粉末注射劑的消毒。常用的氣態(tài)殺菌劑：環(huán)氧乙烷、甲醛、丙二醇、甘油和過(guò)氧乙酸。
藥液滅菌法    該法常作為其他滅菌法的輔助措施，適用于皮膚、無(wú)菌器具和設(shè)備的消毒。常用的消毒液有：75%乙醇、1%聚維酮碘溶液、0.1~0.2%新潔爾滅溶液、酚或煤酚皂溶液等。
（三）無(wú)菌操作法  系指整個(gè)過(guò)程控制在無(wú)菌條件下進(jìn)行的一種操作方法。
該法適用于一些不耐熱藥物的注射液、眼用制劑、皮試液、海綿劑和創(chuàng)傷制劑的制備.無(wú)菌操作法包括無(wú)菌操作室的滅菌和無(wú)菌操作兩個(gè)環(huán)節(jié)。
1. 無(wú)菌操作室的滅菌
常采用紫外線(xiàn)、液體和氣體滅菌法對(duì)無(wú)菌操作室環(huán)境進(jìn)行滅菌。常用甲醛溶液加熱熏蒸法。
2. 無(wú)菌操作
（四）滅菌參數(shù)（F值和F₀值）
1. D值  在一定溫度下，殺滅90%位身無(wú)（或殘存率為10%）所需的滅菌時(shí)間。lgN0-lgNt=kt/2.303             D = t = 2.303/k(lg100-lg10)
D值為降低被滅菌物品中微生物數(shù)至原來(lái)1/10或降低一個(gè)對(duì)數(shù)單位（lg100降至lg10）所需的時(shí)間。
2. Z值  降低一個(gè)lgD值所需升高的溫度,即滅菌時(shí)間減少到原來(lái)的1/10所需升高的溫度或在相同滅菌時(shí)間內(nèi),殺滅99%的微生物所需提高的溫度.
Z＝T₂－T₁／logD₂－logD₁
3.F值  在一定滅菌溫度（T）下給定的Z值所產(chǎn)生的滅菌效果與在參比溫度（T_o）下給定的F值所產(chǎn)生的滅菌效果相同時(shí)所相當(dāng)?shù)臅r(shí)間。常用于干熱滅菌，單位：min。
 
            F = △t ∑10                    
4.F0值  在一定滅菌溫度（T）、Z值為10℃所產(chǎn)生的滅菌效果與121 ℃、Z值為10℃所
產(chǎn)生的滅菌效果相同時(shí)所相當(dāng)?shù)臅r(shí)間。 
                               F0 = △t ∑10
                             F0=D121℃×(lgN0-lgNt)
F₀值僅限于熱壓滅菌，生物F₀值相當(dāng)于121℃熱壓滅菌時(shí)，殺滅容器中全部微生物所需要的時(shí)間。F₀值體現(xiàn)了滅菌溫度與時(shí)間對(duì)滅菌效果的統(tǒng)一，數(shù)值更為精確、實(shí)用。
為了確保滅菌效果，應(yīng)適當(dāng)增加安全系數(shù)，一般增加理論值 的50%。
影響F0值的主要因素
 
三、空氣凈化技術(shù)
空氣凈化系指創(chuàng)造潔凈空氣為目的的空氣調(diào)節(jié)措施。
空氣凈化技術(shù)系指為達(dá)到毛中凈化要求所采用的凈化方法。分為工業(yè)凈化和生物凈化。
空氣凈化標(biāo)準(zhǔn)
1.含塵濃度   是指單位體積空氣中所含粉塵的個(gè)數(shù)（計(jì)數(shù)濃度）或毫克量（重量濃度）。
2.凈化方法（1）一般凈化 （2）中等凈化 （3）超凈凈化
浮沉濃度測(cè)定方法  
無(wú)菌檢查法
 
空氣凈化技術(shù)
1. 過(guò)濾方式：（1）表面過(guò)濾       （2）深層過(guò)濾
2. 過(guò)濾機(jī)理：（1）攔截作用       （2）吸附作用
3. 影響因素：粒徑、過(guò)濾風(fēng)速、介質(zhì)纖維直徑和密實(shí)性、附塵。
空氣過(guò)濾器的特性   1）過(guò)濾效率  2）穿透率和凈化系數(shù)  3）容塵量
四、冷凍干燥技術(shù)  是指將含有大量水分的物料預(yù)先進(jìn)行降溫，凍結(jié)成冰點(diǎn)以下的固體。在真空條件下使冰直接升華，以水蒸氣形式除去，得到干燥產(chǎn)品的一種技術(shù)。亦稱(chēng)升華干燥。
第二節(jié)  注射劑
一、注射劑的定義  注射劑(Injection)俗稱(chēng)針劑，系指藥物制成的供注入機(jī)體內(nèi)的一種制劑。包括滅菌或 無(wú)菌溶液、乳狀液和混懸液以及供臨用前配成溶液或混懸液的無(wú)菌粉末。由藥物、溶劑、附加劑及特制容器所組成。
注射劑的分類(lèi)
(1) 溶液型注射劑
(2) 混懸型注射劑   水難溶性藥物或注射后要求延長(zhǎng)藥效作用的藥物，可制成水或油的混懸液，如醋酸可的松注射液、喜樹(shù)堿靜脈注射液。這類(lèi)注射劑一般僅供肌內(nèi)注射。
(3) 乳劑型注射劑   水不溶性液體藥物，根據(jù)醫(yī)療需要可以制成乳劑型注射劑，例如膠丁鈣注射液和靜脈營(yíng)養(yǎng)脂肪乳注射劑等。
(4) 注射用無(wú)菌粉末  注射用無(wú)菌粉劑亦稱(chēng)粉針，是指采用無(wú)菌操作法或凍干技術(shù)制成的注射用無(wú)菌粉末或塊狀制劑，制劑需用用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙饣蚴蛊浠鞈叶鴳?yīng)用。
注射劑的給藥途徑
(1) 皮內(nèi)注射[intradermal (ID) route]
(2)皮下注射[subcutaneous (SC) route]  由于人體皮下感覺(jué)比肌肉敏感；故具有刺激性的藥物混懸液一般不作皮下注射。
 (3)肌內(nèi)注射[intramuscular (IM) route]  注射肌肉組織中，一次劑量一般在5ml以下，除水溶液外，油溶液、混懸液、乳濁液均可作肌內(nèi)注射。
 (4) 靜脈注射[intravenous (IV) route]   油溶液和一般混懸型注射液不能作靜脈注射。凡能導(dǎo)致紅血球溶解或使蛋白質(zhì)沉淀的藥物，均不宜靜脈給藥。
 (5) 脊椎腔注射[vertebro caval route]
（6）動(dòng)脈內(nèi)注射 （intra-arterial route)
（7 ）其他  包括心內(nèi)注射、關(guān)節(jié)內(nèi)注射、滑膜腔注射、穴位注射以及鞘內(nèi)注射等。
注射劑的特點(diǎn) 
(1) 藥效迅速，作用可靠(2) 適用于不能口服給藥的患者 (3) 適用于不宜口服的藥物(4) 發(fā)揮局部定位作用(5) 注射給藥不方便且注射時(shí)疼痛 (6) 制造過(guò)程復(fù)雜，生產(chǎn)費(fèi)用較大，價(jià)格 較高。
注射劑的質(zhì)量要求 
(1) 無(wú)菌 (2) 無(wú)熱原 (3) 澄明度(4) 安全性(5) 滲透壓(6) pH(7) 穩(wěn)定性(8) 降壓物質(zhì)
二、注射劑的處方組成  注射液用原料、注射用溶劑、注射用附加劑、注射劑的等滲與等張調(diào)節(jié)、注射用原料
注射用原料必須符合藥典或國(guó)家質(zhì)量藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
注射用溶劑 包括：注射用水、注射用油、其他注射用非水溶劑。
1.注射用水  制藥用水包括純化水、注射用水與滅菌注射用水。
純化水用原水經(jīng)蒸餾法、離子交換法、反滲透法或其它適宜的制得的供藥用的水，可作為配制普通藥物制劑的溶劑或試驗(yàn)用水，不得用于注射劑的配制。
注射用水為純化水經(jīng)蒸餾所得的蒸餾水，作為配制注射劑用的溶劑。
滅菌注射用水為滅菌后的注射用水，主要用于注射用滅菌粉末的溶劑或注射液的稀釋劑。
純化水可作為
 
2.注射用油  包括：植物油（主要為大豆油）、油酸乙酯、苯甲酸芐酯
碘值為79～128；皂化值為185～200；酸值不大于0.56 。
碘值說(shuō)明油中不飽和鍵的多少，碘值高，則不飽和鍵多，油易氧化酸敗 ，不適合注射用。皂化值表示油中游離脂肪酸和結(jié)合成酯的脂肪酸的總量多少，可看出油的種類(lèi)和純度。酸值說(shuō)明油中游離脂肪酸的多少，酸值高質(zhì)量差，也可以看出酸敗的程度。
礦物油和碳?xì)浠衔锊荒鼙粰C(jī)體吸收，故不能被注射用。油性注射劑只能供肌肉注射。
3、其他注射用溶劑   (1) 乙醇 (2) 甘油 (3) 丙二醇 (4) 二甲基乙酰胺(Dimethylacetamide, DMA)
（三）注射劑的附加劑
為了提高注射劑的有效性、安全性與穩(wěn)定性，注射劑中除主藥外還可添加其它物質(zhì)，這些物質(zhì)統(tǒng)稱(chēng)為"附加劑"。
附加劑在注射液中的主要作用：（1）增加藥物的理化穩(wěn)定性（2）增加主藥的溶解度（3）抑制微生物生長(zhǎng)，尤其對(duì)多劑量注射劑更要注意（4）減輕疼痛或?qū)M織的刺激性。
注射劑常用的附加劑有：pH和等滲調(diào)節(jié)劑、增溶劑、麻醉劑、抑菌劑、抗氧劑等。另外還有濕潤(rùn)劑、乳化劑、緩沖劑、助懸劑、螯合劑、穩(wěn)定劑等
（四）注射劑的等滲與等張調(diào)節(jié)
(1)冰點(diǎn)降低數(shù)據(jù)法：
血漿的冰點(diǎn)為-52℃，因此任何溶液，只要其冰點(diǎn)降低為0.52℃,即與血漿等滲
 W =( 0.52-a )/b。
W：配成等滲溶液所需加入藥物的量(%, g/ml)  a: 未經(jīng)調(diào)整的藥物溶液的冰點(diǎn)下降度   b: 用以調(diào)整等滲的藥物1%(g/ml)溶液的冰點(diǎn)下降度。
(2)氯化鈉等滲當(dāng)量，即與1g藥物呈等滲效應(yīng)的氯化鈉量。
公式：
例如頭孢噻吩鈉(cephalotin sodium)的氯化鈉等滲當(dāng)量為0.24，若配制2%的頭孢噻吩鈉溶液100ml，欲使其等滲，需加入氯化鈉為0.9 -0.24´2 = 0.42g氯化鈉。
滲透壓調(diào)節(jié)劑常用氯化鈉與葡萄糖。
3)等滲溶液與等張溶液：
等滲溶液(Iso-osmotic solution)是指滲透壓與血漿相等的溶液，
所謂等張溶液(Isotonic solution)是指與紅細(xì)胞膜張力相等的溶液，在等張溶液中既不會(huì)發(fā)生紅細(xì)胞體積改變，更不會(huì)發(fā)生溶血，所以等張是個(gè)生物學(xué)概念。
第三節(jié) 注射劑的制備
注射劑一般生產(chǎn)過(guò)程包括：
注射用水為
注射用水的制備
原水處理 原水處理方法有離子交換法與電滲析法及反滲透法。離子交換法制得的離子交換水主要供蒸餾法制備注射用水使用，也可用于洗瓶，但不得用來(lái)配制注射液，因其在除熱原方面還不如蒸餾法那樣可靠，有時(shí)還帶有乳光。電滲析法與反滲透法廣泛用于原水預(yù)處理，供離子交換法使用，以減輕離子交換樹(shù)脂的負(fù)擔(dān)。
 (三) 熱原
熱原(Pyrogens)  注射后能引起人體致熱反應(yīng)的物質(zhì)稱(chēng)為熱原。它是微生的代謝產(chǎn)物。大多數(shù)細(xì)菌都能產(chǎn)生，致熱能力最強(qiáng)的是革蘭氏陰性桿菌所產(chǎn)生的熱原。  
1. 熱原的組成   熱原是微生物的一種內(nèi)毒素，它存在于細(xì)菌的細(xì)胞膜和固體膜之間。是由磷脂、脂多糖和蛋白質(zhì)所組成的復(fù)合物，其中脂多糖(lipopolysaccharide)是內(nèi)毒素的主要成分，具有特別強(qiáng)的熱原活性，因而大致可以認(rèn)為內(nèi)毒素=熱原=脂多糖。
2.熱原的性質(zhì)  (1) 耐熱性 (2) 濾過(guò)性 (3) 水溶性 (4) 不揮發(fā)性 (5) 其它  熱原能被強(qiáng)酸、強(qiáng)堿破壞，也能被強(qiáng)氧化劑如高錳酸鉀或過(guò)氧化氫所鈍化，超聲波也能破壞熱原。（活性炭可以吸附熱原）
3  熱原的主要污染途徑  (1) 從溶劑中帶入（主要途徑） (2) 從原料中帶入 (3) 從容器、用具、管道和裝置等帶入 (4) 制備過(guò)程與生產(chǎn)環(huán)境中的污染 (5) 從輸液器帶入
4.  熱原的除去方法
(1) 高溫法  對(duì)于注射用的針筒或其他玻璃器皿，在洗滌干燥后，于250℃加熱30分鐘以上，可以破壞熱原；
(2) 酸堿法  玻璃容器、用具還可用重鉻酸鉀硫酸清潔液或稀氫氧化鈉處理，可將熱原破壞；
(3) 吸附法  常用的吸附劑有活性炭，活性炭對(duì)熱原有較強(qiáng)的吸附作用，同時(shí)有助濾脫色作用，所以在注射劑中使用較廣。
(4) 離子交換法  (5) 凝膠濾過(guò)去   (6) 反滲透法 (7) 超濾法 (8) 其他方法：
 
第三節(jié)  注射劑的制備
1.       原輔料的準(zhǔn)備
2.       注射容器的處理
3.       注射液的配制與過(guò)濾
4.       注射液的灌封
5.       注射劑的滅菌和檢漏
3、注射液的配制與濾過(guò)
配制方法  配液方式有兩種，一種是將原料加入所需的溶劑中一次配成所需的濃度即所謂稀配法，原料質(zhì)量好的可用此法。另外還有全部原料藥物加入部分溶劑中配成濃溶液，加熱過(guò)濾，必要時(shí)也可冷藏后再濾過(guò)，然后稀釋至所需濃度，此法叫濃配法，溶解度小的雜質(zhì)在濃配時(shí)可以濾過(guò)除去。
影響過(guò)濾的因素：P80

(一) 注射劑的滅菌
對(duì)熱不穩(wěn)定的產(chǎn)品，在避菌條件較好的情況下生產(chǎn)的注射劑，一般1～5ml安瓿可用流通蒸氣滅菌100℃30分鐘，10～20ml安瓿使用100℃45分鐘。滅菌時(shí)間還可根據(jù)情況延長(zhǎng)或縮短。要求按滅菌效果F₀值大于8進(jìn)行驗(yàn)證。凡能耐熱的產(chǎn)品，宜采用115℃30分鐘滅菌。六、注射劑的質(zhì)量檢查
(一) 澄明度檢查（可見(jiàn)異物）
(二) 熱原檢查   熱原檢查目前各國(guó)藥典法定的方法仍為家兔法。選用家兔作試驗(yàn)動(dòng)物，是因?yàn)榧彝脤?duì)熱原的反應(yīng)和人是相同的。   
鱟試驗(yàn)法：鑒于家兔法費(fèi)時(shí)較長(zhǎng)，操作繁瑣，近年來(lái)發(fā)展了體外熱原試驗(yàn)法即鱟試驗(yàn)法，其原理是利用鱟(Limus polyphemus)的變形細(xì)胞溶解物(amebecyte lysate)與內(nèi)毒素之間的凝集反應(yīng)。
(三) 無(wú)菌檢查
(四) 降壓物質(zhì)檢查
（五）不溶性顆粒檢查八、注射劑的舉例
(一) 鹽酸普魯卡因注射液(procaine hydrochloride injection)
    處方                  0.5%                        2%
：鹽酸普魯卡因    5.0g                         20.0g
 氯化鈉               8.0g                         4.0g
0.1 mol/L鹽酸   適量                         適量
注射用水加到1000ml                       1000ml
制法  取注射用水約800ml，加入氯化鈉，攪拌溶解，再加鹽酸普魯卡因使之溶解，加入0.1mol/L的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH，再加水至足量，攪勻，過(guò)濾分裝于中性玻璃容器中，用流通蒸氣100℃30分鐘滅菌，瓶裝者可適當(dāng)延長(zhǎng)滅菌時(shí)間(100℃45分鐘)。
作用與用途  本品為局部麻醉藥，用于封閉療法、浸潤(rùn)麻醉和傳導(dǎo)麻醉。
注解  (1) 本品為酯類(lèi)藥物故易水解。影響本品穩(wěn)定性的因素及解決辦法參看第五章有關(guān)部分。保證本品穩(wěn)定性的關(guān)鍵是調(diào)節(jié)pH，本品pH應(yīng)控制在3.5～5.0。滅菌溫度不宜過(guò)高，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。
(2) 氯化鈉用于調(diào)節(jié)等滲，實(shí)驗(yàn)表明還有穩(wěn)定本品的作用。未加氯化鈉的處方，一個(gè)月分解1.23%，加0.85%氧化鈉的僅分解0.4%。
(3) 極少數(shù)病人對(duì)本品有過(guò)敏反應(yīng)，故用藥前詢(xún)問(wèn)病人過(guò)敏史或做皮內(nèi)試驗(yàn)(0.25% 普魯卡因溶液0.1ml)。
維生素C注射液(抗壞血酸)(Vitamin C injection
 處方
維生素C                                     104g
依地酸二鈉                                0.05g
碳酸氫鈉                                       49g
亞硫酸氫鈉                                     2g
 注射用水加到                             1000ml
制法  在配制容器中，加配制量80%的注射用水，通二氧化碳飽和，加維生素C溶解后，分次緩緩加入碳酸氫鈉，攪拌使完全溶解，加入預(yù)先配制好的依地酸二鈉溶液和亞硫酸氫鈉溶液，攪拌均勻，調(diào)節(jié)藥液pH 6.0～6.2，添加二氧化碳飽和的注射用水至足量，用垂熔玻璃漏斗與膜濾器濾過(guò)，溶液中通二氧化碳，并在二氧化碳或氮?dú)饬飨鹿喾?，最后?00℃流通蒸氣15分鐘滅菌。
注釋(1) 維生素C分子中有烯二醇式結(jié)構(gòu)，故顯強(qiáng)酸性。加入碳酸氫鈉(或碳酸鈉)，使維生素C部分地中和成鈉鹽，以避免疼痛。同時(shí)碳酸氫鈉起調(diào)節(jié)pH的作用，以增強(qiáng)本品的穩(wěn)定性。
(2) 維生素C的水溶液與空氣接觸，自動(dòng)氧化成脫氫抗壞血酸。。
(3) 本品穩(wěn)定性與溫度有關(guān)。，故以100℃15分鐘滅菌為好。但操作過(guò)程應(yīng)盡量在避菌條件下進(jìn)行，以防污染。
 
第四節(jié)  輸 液
輸液(infusion solution)是指由靜脈滴注輸入體內(nèi)的大劑量注射液，它是注射劑一個(gè)分支。
(一) 輸液的種類(lèi)
1. 電解質(zhì)輸液   用以補(bǔ)充體內(nèi)水份、電解質(zhì)，糾正體內(nèi)酸堿平衡等。如氯化鈉注射液、復(fù)方氯化鈉注射液、乳酸鈉注射液等。
2. 營(yíng)養(yǎng)輸液  營(yíng)養(yǎng)輸液有糖類(lèi)輸液、氨基酸輸液、脂肪乳劑輸液等。
3. 膠體輸液  膠體輸液有多糖類(lèi)、明膠類(lèi)、高分子聚合物等，
 (二) 輸液的質(zhì)量要求
 輸液的質(zhì)量要求與注射劑基本上是一致的，但由于這類(lèi)產(chǎn)品注射量較大，故對(duì)無(wú)菌、無(wú)熱原及澄明度這三項(xiàng)，更應(yīng)特別注意。滲透壓可為等滲或偏高滲，不能引起血象的任何異常變化。此外輸液要求不能有產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)的異性蛋白及降壓物質(zhì)。輸液中不得添加任何抑菌劑，并在貯存過(guò)程中質(zhì)量穩(wěn)定。
二、輸液的生產(chǎn)工藝 
輸液的配制  輸液配制通常加入0.01%～0.5%的針用活性炭，具體用量，視品種而異，活性炭有吸附熱原、雜質(zhì)和色素的作用，并可作助濾劑。
 (七) 輸液的質(zhì)量檢查   1. 澄明度與微粒檢查  2. 熱原無(wú)菌檢查  3. 酸堿度及含量測(cè)定
三、輸液存在的問(wèn)題及解決方法 
(一)染菌  根本辦法是盡量減少生產(chǎn)過(guò)程中的污染，同時(shí)還要嚴(yán)格滅菌，嚴(yán)密包裝。
(二)熱原反應(yīng)  盡量使用全套或一次性的輸液器，為避免熱原污染創(chuàng)造有利條件。
(三)澄明度與微粒的問(wèn)題  微粒產(chǎn)生的原因是多方面的。如工藝操作中的問(wèn)題原輔料質(zhì)量問(wèn)題等。解決辦法除了加強(qiáng)工藝過(guò)程管理，制訂了輸液用的原輔料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
五、營(yíng)養(yǎng)輸液  由于某種原因，患者一切所需營(yíng)養(yǎng)完全由非胃腸途徑輸入體內(nèi)，這種療法稱(chēng)為胃腸外的全營(yíng)養(yǎng)液(total parenteral nutrition)，這種營(yíng)養(yǎng)方法一般是將營(yíng)養(yǎng)輸液通過(guò)靜脈給藥，所以又叫全靜脈營(yíng)養(yǎng)。
糖、脂肪、蛋白質(zhì)是人的三大營(yíng)養(yǎng)成份，而營(yíng)養(yǎng)輸液就是根據(jù)這種需要考慮的，主要有碳水化合物的輸液、靜脈注射脂肪乳劑、復(fù)方氨基酸輸液。
 (一)復(fù)方氨基酸注射液(輸液)
1. 處方設(shè)計(jì)
必需氨基酸，這類(lèi)氨基酸有異亮氨酸、亮氨酸、賴(lài)氨酸、蘇氨酸、色氨酸、蛋氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸。
2. 生產(chǎn)中的問(wèn)題 
復(fù)方氨基酸注射液的生產(chǎn)，主要存在二個(gè)問(wèn)題，一是澄明度，影響澄明度的關(guān)鍵是原料純度，一般均需反復(fù)精制。其次是穩(wěn)定性，主要表現(xiàn)為含量下降色澤變深，其中以變色最為明顯。
影響穩(wěn)定性的因素有氧氣、光、溫度、金屬離子、pH等，故輸液要通氮?dú)猓{(diào)節(jié)pH，加入抗氧劑等措施，并避免金屬離子混入，避光保存。
 (二)靜脈注射脂肪乳劑  靜脈注射脂肪乳劑輸液是以植物油脂為主要成份，加乳化劑與注射用水而制成的水包油型乳劑。
制備靜脈注射脂肪乳劑的關(guān)鍵是選用高純度原料、毒性低、乳化力強(qiáng)的乳化劑，
 
第五節(jié)  注射用無(wú)菌粉末
注射用無(wú)菌粉末簡(jiǎn)稱(chēng)粉針。凡是在水溶液中不穩(wěn)定的藥物，如青霉素G、先鋒霉素類(lèi)及一些醫(yī)用酶制劑(胰蛋白酶、輔酶A)及血漿等生物制劑，均需制成注射用無(wú)菌粉末。
分類(lèi)將冷凍干燥法制得的粉末，稱(chēng)為注射用冷凍干燥制品，而用其它方法如滅菌溶劑結(jié)晶法、噴霧干燥法制得的稱(chēng)為注射用無(wú)菌分裝產(chǎn)品。
二、注射用冷凍干燥制品
冷凍干燥是將需要干燥的藥物溶液預(yù)先凍結(jié)成固體，然后在低溫低壓條件下，從凍結(jié)狀態(tài)不經(jīng)過(guò)液態(tài)而直接升華除去水分的一種干燥方法。凡是對(duì)熱敏感在水溶液中不穩(wěn)定的藥物，可采用此法制備。
冷凍干燥的優(yōu)點(diǎn)是：①可避免藥品因高熱而分解變質(zhì)，如產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)則不致變性；②所得產(chǎn)品質(zhì)地疏松，加水后迅速溶解恢復(fù)藥液原有的特性；③含水量低，一般在1～3%范圍內(nèi)，同時(shí)干燥在真空中進(jìn)行，故不易氧化，有利于產(chǎn)品長(zhǎng)期貯存；④產(chǎn)品中的微粒物質(zhì)比用其它方法生產(chǎn)者少，因?yàn)槲廴緳C(jī)會(huì)相對(duì)減少；⑤產(chǎn)品劑量準(zhǔn)確，外觀優(yōu)良。
 (二)冷凍干燥制品的工藝
冷凍干燥工藝過(guò)程  (1) 預(yù)凍（2）減壓 (3)升華干燥  (4)再干燥
升華干燥法有兩種，一種是一次升華法，另一種是反復(fù)預(yù)凍升華法。
(三) 冷凍干燥過(guò)程中常出現(xiàn)的異常現(xiàn)象及處理方法
1.含水量偏高
原因：裝入容器液層過(guò)厚，超過(guò)10 ～15mm ； 干燥過(guò)程中熱量供給不足，使蒸發(fā)量減少；真空度不夠，冷凝器溫度偏高等，均可造成含水量偏高。 方法： 可采用旋轉(zhuǎn)冷凍機(jī)及其它相應(yīng)的辦法解決。
2. 噴瓶
原因： 主要預(yù)凍溫度過(guò)高，產(chǎn)品凍結(jié)不實(shí)；  升華時(shí)供熱過(guò)快，局部過(guò)熱，部分制品熔化為液體，在高真空條件下，少量液體從已干燥的固體界面下噴出而形成噴瓶。 方法： 為了防止噴瓶，必須控制預(yù)凍溫度在低共熔點(diǎn)以下10 ～20℃ ，同時(shí)加熱升華，溫度不要超過(guò)共熔點(diǎn)。
3. 產(chǎn)品外形不飽滿(mǎn)或萎縮成團(tuán)粒
原因，可能是凍干時(shí)，開(kāi)始形成的已干外殼結(jié)構(gòu)致密，升華的水蒸氣穿過(guò)阻力很大，水蒸汽在已干層停滯時(shí)間較長(zhǎng)，使部分藥品逐漸潮解，以致體積收縮，外形不飽滿(mǎn)或成團(tuán)粒。粘度較大的樣品更易出現(xiàn)這類(lèi)現(xiàn)象。解決辦法主要從配制處方和凍干工藝兩方面考慮，可以加入適量甘露醇、氯化鈉等填充劑，或采用反復(fù)預(yù)冷升華法，改善結(jié)晶狀態(tài)和制品的通氣性，使水蒸氣順利逸出，產(chǎn)品外觀就可得到改善。
三、注射用無(wú)菌分裝產(chǎn)品
 (一) 注射用無(wú)菌粉末物理化學(xué)性質(zhì)的測(cè)定   為了制訂合理的生產(chǎn)工藝，首先對(duì)藥物的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究，主要測(cè)定物料的熱穩(wěn)定性，臨界相對(duì)濕度、粉末的晶形和粉末松密度( 比容) 。
 
第七節(jié)  眼用制劑
滴眼劑(英: Eye-drop)：
眼用液體藥劑按用法可分為滴眼劑及洗眼劑。工業(yè)生產(chǎn)只有滴眼劑。
滴眼劑的質(zhì)量要求1. pH值2. 滲透壓3. 無(wú)菌4. 澄明度5. 粘度6. 穩(wěn)定性
（一）吸收途徑： 主要經(jīng)過(guò)角膜和結(jié)膜兩條途徑吸收
(二) 影響吸收的因素：1. 藥物從眼瞼縫隙的損失2. 藥物外周血管消除3. pH與pKa  4. 刺激性5. 表面張力6. 粘度
三、滴眼劑的生產(chǎn)工藝
滴眼劑的處方設(shè)計(jì)與附加劑選用 
(一) pH值的調(diào)整
(二) 滲透壓的調(diào)整 
(三) 無(wú)菌度的保持 
(四) 粘度的調(diào)整
(五) 穩(wěn)定劑、增溶劑、助溶劑等的添加